未来DC疫苗的治疗策略

迄今为止，DC疫苗的安全性已在临床试验中得到充分证实。观察到的副作用相对较轻，主要为发热、注射部位反应、淋巴结肿大和疲劳。多数临床试验证实，DC疫苗具有免疫原性，可以诱导肿瘤特异性T细胞免疫应答。一项Meta分析表明，DC疫苗可在77%前列腺癌患者和61%肾癌患者中诱导肿瘤特异性免疫应答。然而，或由于DC疫苗的质量原因，其确切的临床疗效仍未得到证实。DC疫苗的最佳制备方法仍有待进一步探索。目前通过共刺激因子的高表达来判断DCs的成熟，通过IL-12的分泌来鉴定疫苗的疗效。但是DC分泌的IL-12是否充足，是否还可以在回输到患者体内后持续分泌IL-12，是否还可以激活T细胞，诸多问题仍待探索。此外，由于DC疫苗本身可能无法直接发挥免疫功能，需要由淋巴结常驻DC交叉呈递抗原，而大多数DC疫苗不能迁移到淋巴结刺激T细胞。即使到达淋巴结，DC疫苗还可能会诱导Tregs和Th2的免疫反应。另一方面，肿瘤的内在因素也是导致DC疫苗治疗失败的原因。肿瘤抗原表达的缺失、MHC分子的突变、共刺激因子的缺乏、抑制性配体的表达、Tregs的诱导、IDO的表达和或免疫抑制性细胞因子的产生等，都可能会抑制DC疫苗的抗肿瘤能力。因此，优化DC疫苗的制备，并克服肿瘤微环境的免疫逃逸可能会提高DC疫苗的疗效。目前，解决这些问题的方法正在研究中。

1.与调节肿瘤微环境的药物联合应用

多种疗法的联合治疗策略可能会是DC疫苗成功的关键。FDA批准的检查点抑制剂对免疫治疗产生了重大的影响，既可单一用药，又可以与其他疗法联合应用。近期一项临床研究表明，将编码CD40L、CD70、组成性激活的TLR4与黑色素瘤相关的抗原（gp100、酪氨酸酶、MAGE-A3或MAGE-C2）的mRNA电转入融合了HLAⅡ类靶向信号(DC-LAMP)的DCs中（也称为TriMix-DC-MEL），并联合使用CTLA-4的单抗药物ipilimumab治疗晚期黑色素瘤患者，患者的总体缓解率可达38%。目前，使用DC疫苗联合免疫检查点抑制剂的临床试验正在进行（NCT02677155和NCT01067287），但仍需要系统地试验和评估联合治疗策略中疫苗接种的时机、免疫检查点抑制剂的类型和数量等。

另外，目前也可以通过调节肿瘤微环境使DC疫苗可以有效地诱导免疫应答，促进CD8+T细胞、NK细胞等具有杀伤作用的细胞的浸润。Talimogene laherparepvec（T-VEC或OncoVEX）是FDA批准的首个用于治疗转移性黑色素瘤的溶瘤病毒，衍生自人类单纯疱疹病毒1并编码GM-CSF。溶瘤病毒不仅可以直接作用于肿瘤细胞，还可以激活先天免疫、诱导特异性抗肿瘤免疫应答，有效降低肿瘤微环境中的免疫抑制作用。还可通过模拟病毒感染肿瘤的瘤内注射方法，如瘤内注射poly-I:C或CpG，以改善肿瘤微环境，且不会引起全身性的抗病毒免疫等副作用；亦可通过瘤内给予STING激动剂激活STING信号通路，上调IFN-β的表达，诱导小鼠模型中远端肿瘤的消退。另外，如前文所提，瘤内给予FLT3L，将DCs动员到肿瘤微环境中并同时刺激DCs的成熟，可有效诱导抗肿瘤T细胞的免疫应答。

2.制备DCs新方案　

另一种从人类多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs)诱导分化DCs获得DCs的策略正在探索。目前，有两种从hPSCs分化DCs的方法：一种使用类胚体，模仿胚发育的聚集体样结构；另一种方法借助与基质细胞系的共培养。两种分化方法均需要多个步骤，利用多种生长因子（如BMP-4、VEGF、GM-CSF、SCF、Flt3L、IL-4等）分步诱导分化。使用生物反应器进行hPSCs的分化，可以进行大规模生产。近期一项研究，使用慢病毒将MART-1抗原转导入hPSCs细胞，将转导的hPSCs分化成DCs，在TNF的刺激下诱导DCs成熟。DCs与T细胞共培养后，可激活MART-1特异性CD8+T细胞的免疫应答。因此，这种方案有潜力生产无限量的DC疫苗，能够直接转导抗原，可呈递至MHCⅠ类分子上，并刺激CD8+T细胞的免疫应答。而且还可以进一步分离免疫原性较强的CD141+DCs，以期提高DC疫苗诱导的免疫应答。还可应用近几年发展起来的Crispr/Cas9技术，敲除DCs中免疫检查点配体PDL1、免疫抑制细胞因子IL-10等基因，以降低DCs的免疫抑制性。