DCs的成熟

成熟DCs的共刺激分子表达水平增加，可产生激活T细胞应答所需的细胞因子和趋化因子，并且可以迁移到淋巴组织。相反，未成熟的DCs不能诱导抗原的特异反应，还可能诱导T细胞向Tregs分化。目前的临床研究表明，在健康受试者和转移性黑色素瘤患者中，只有负载抗原多肽的成熟DCs才具有诱导抗原特异性T细胞的应答。

在实验室中，TLR激动剂，如LPS(TLR4)，poly-I:C(TLR3)和雷西莫德(TLR7)，均可作为DCs的激活剂。在临床上，有多种方式可诱导DCs的成熟。

使用促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)用来激活DCs曾经被认为是激活DCs的黄金标准。这一组合可以诱导MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子、CD40、CD80、CD86和CCR7的表达，但是不能有效诱导IL-12p70的表达。然而其中的PGE2可诱导T细胞向Tregs和Th2分化，表达IDO，抑制IL-12p70的表达。也有研究表明PGE2通过上调CCR7来促进DCs迁移至淋巴器官，并通过诱导DCs表达OX40L、CD70和4-1BBL来促进T细胞的增殖。另外一组DCs激活剂由CD40L三聚体、poly-I:C和LPS组成，是目前最有效的诱导DCs成熟的激活剂组合，可有效诱导DCs表达激活性分子，并刺激同种异体T细胞的增殖和细胞因子的分泌，激活Th1免疫应答。

此外，还有很多方法也可诱导DCs的成熟。CD40L主要由活化的T细胞和B细胞表达，可与DCs表面的受体CD40结合，从而诱导DCs表面共刺激因子的表达上调和IL-12等细胞因子的分泌。使用经致死剂量照射的过表达CD40L的K562细胞系(K562-CD40L)作为饲养层细胞，同时在培养体系中加入IFN-γ诱导DCs成熟，可以用于治疗黑色素瘤患者。结果显示，该体系诱导的DCs可分泌IL-12p70，且IL-12p70的分泌水平与诱导的CD8+T细胞的特异免疫应答水平呈正相关。目前，TLR激动剂也已在临床上用于DCs的激活。TLR的激活可诱导DCs成熟，从而上调共刺激分子的表达以及细胞因子和趋化因子的分泌。同时激活多个TLRs可触发协同信号(synergistic effects)，促进IL-12的分泌。因此，目前TLR激动剂具有最佳的诱导DC成熟的潜力，可刺激有效的免疫反应并调节体内环境以促进免疫应答。使用TLR3激动剂poly-I:C联合TNF-α、IL-1β、IFN-α和IFN-γ诱导MDDCs成熟，该成熟的DCs被称为α-型-1极化DCs(αDC1)，此类DCs可产生高水平的IL-12p70，并迁移至表达CCR7配体的淋巴结，以诱导特异性CD8+T细胞的免疫应答。晚期脑胶质瘤相关临床试验证实，使用αDC1进行的免疫治疗是安全有效的——在22位经治疗的患者中，9位患者可达到疾病无进展状态至少12个月。临床级TLR4激动剂LPS也已用于诱导DCs的成熟，可促进黑色素瘤患者的DCs分泌IL-12p70，以诱导肿瘤特异T细胞免疫应答。目前已从沙门菌R595分离得到低毒改良型LPS——3-O-去酰基单磷酰脂质A(3-O-deacylated monophosphoryl lipid A,MPLA)，并获批用于临床治疗。联合使用MPLA和IFN-γ诱导的成熟DCs，可在体外分泌大量IL-12p70并刺激CD8+T细胞免疫应答。

将含有TLRs激动剂的预防性疫苗的混合液可以在体外刺激DCs的成熟，如卡介苗、流感疫苗和伤寒疫苗。成熟的DCs表现出CD80、CD83和CD86的高表达，并具备IL12p70的分泌能力及迁移能力。将使用预防性疫苗混合液诱导的成熟DCs回输黑色素瘤患者，可激活患者体内T细胞的免疫应答并延长患者的生存期，但是在许多患者中观察到，预防性疫苗混合液中的卡介苗可引发局部或全身性2级和3级不良事件，并阻碍该方法的进一步应用。

另一个可能影响DC疫苗质量的潜在因素是DCs成熟的时机(timing)。临床试验中使用的DC疫苗通常会诱导24～48小时使其成熟，并在此期间检测细胞因子的分泌[插图]。然而，DCs通常在诱导成熟的24小时之内分泌细胞因子，并在再次与T细胞表面的CD40L相互作用后分泌细胞因子。因此，可将诱导DCs成熟的时间缩短至24小时之内，使其在回输之前始终保持细胞因子的分泌能力。

总之，无论何种方案，诱导DCs成熟的原则是产生有效的APCs以成功地激活免疫应答。